流式熒光法（Flow Cytometry）在檢測細胞因子時，為了定量分析細胞因子的濃度，通常需要建立一個標準曲線，該曲線是通過測量一系列已知濃度的標準品（通常是純化的細胞因子）的熒光強度來建立的。選擇合適的擬合模型可以確保標準曲線的準確性。然而在，流式熒光法中，細胞因子的濃度與熒光強度之間的關系往往是非線性的。這種非線性關系通常表現(xiàn)為S形曲線，即隨著濃度的增加，熒光強度的增加速度會發(fā)生變化。常規(guī)的線性擬合無法準確描述這種非線性關系。目前大多數(shù)流式分析軟件采用的是五參數(shù)邏輯回歸（5PL），尤其是在使用流式熒光法等技術進行免疫檢測時。5PL模型比夠更靈活地擬合數(shù)據(jù)，尤其是在數(shù)據(jù)呈現(xiàn)非對稱或非典型S形曲線的情況下。目前有很多流式分析軟件（如FCAP)，都是采用這樣擬合的方法做標準曲線。當有些場景沒辦法用軟件計算時，該怎樣做？下面我們來介紹如何使用origin軟件的五參數(shù)邏輯回歸擬合標準曲線。

1 在originPro軟件中輸入數(shù)據(jù)，X為濃度，Y為熒光強度

2 分析-擬合-非線性曲線擬合-打開對話框

3 對話框中 函數(shù)選擇 Logistic，然后進行擬合

4 得到一系列分析數(shù)據(jù)后，找到擬合曲線圖，并雙擊

5 雙擊后得到一個不怎么好看的曲線

6 將擬合曲線的X軸和Y軸都設置成log10

7 最后得到一條比較絲滑的，R的平方>0.99的標曲（在這里我們用到了5個濃度梯度做標曲，實際上用設置更多的濃度梯度會更好）。

8 在后續(xù)檢測中測到的熒光可以代入到標準曲線擬合的公式中計算出靶標濃度。

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